PrimeScript™ II Reverse Transcriptase

PrimeScript™ II Reverse Transcriptase
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	2690S	2,000 U	300 元
Takara	2690A	10,000 U	1,280 元
Takara	2690B (A × 4)	40,000 U	4,610 元
Takara	2690C (A × 10)	100,000 U	10,880 元

制品内容 (Code No.: 2690A)

PrimeScript™ II Reverse Transcriptase (200 U/μl)	10,000 U
5 × PrimeScript II Buffer	500 μl

制品说明

PrimeScript II Reverse Transcriptase在42℃条件下能够有效地合成低背景、高质量的cDNA，无需进行高温反转录反应，高温的反转录反应会导致RNA的降解，且由于引物的有效使用和辅助蛋白质的添加，避免了因RNA二级结构对cDNA合成的抑制及RT引物错配引起的非特异性延伸。辅助蛋白质完全抑制了由于反转录酶冰上放置引起的非特异性延伸反应，因此，即便是反应液配制到反转录反应开始要间隔一段时间，也不会抑制长链cDNA的合成。合成的cDNA可以广泛应用于2nd-strand合成、杂交、终点PCR和定量PCR，而且本酶特别适用于全长cDNA文库构建用的高质量cDNA合成等。

保存

-20℃。

起源

Purified from an E. coli strain expressing a recombinant enzyme.

活性定义

以poly (rA) ·oligo (dT)12-18 为模板/引物，在37℃的条件下，10分钟内掺入1 nmol [3H] dTTP所需要的酶量定义为1个活性单位(unit)。

1st-Strand cDNA合成实验

根据实验标准条件，以大鼠心脏为材料制备的250 ng总RNA与50 pmol的oligo dT引物在200 units PrimeScript II RTase的作用下，42℃反应30分钟，合成了1st-Stand cDNA。以此反转录产物为模板进行PCR扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测证明得到了13 kb的目的产物。

纯度

1. 200 units的本酶和1 μg的λ-Hind III在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。 2. 对200 units的本酶和1 μg的超螺旋 pBR322 DNA在37℃下反应1小时的DNA电泳谱带进行确认。 3. 200 units的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

用途

1. 1st-Strand cDNA的合成。 2. cDNA Probe的制备。 3. RT-PCR。