Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	2230A	300 U	260 元
Takara	2230B (A × 5)	1,500 U	1,170 元

制品内容

Cloned Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (14 U/μl)	300 U
5 × Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Buffer	1 ml
0.1% × BSA	1 ml

制品说明

本酶催化dNTP聚合于单链或双链DNA的3’-OH末端的反应，该反应不需要模板，但引物必须是至少有3个以上碱基的寡核苷酸。

保存

-20℃。

起源

E. coli carrying the plasmed which encodes the gene of terminal deoxynucleotidyl transferase

活性定义

以DNase处理后的热变性小牛胸腺DNA为起始物，在37℃ 、pH7.2的条件下，1小时内使1 nmol的 [³H]dATP掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

纯度

1. 15 units的本酶和1 μg的λDNA-Hind III分解物在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。  2. 15 units的本酶和1 μg 的超螺旋pBR322 DNA在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。 3. 15 units的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃下反应5小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

特性

1. 分子量：60,000。 2. 最适pH：7.2。 3. 辅因子：二价离子Mg2+，Mn2+或Co2+。 4. 底物特异性：核酸类似物 (如5-甲基-dCTP，6-O-甲基-dGTP等) 可作为底物。 三磷酸双脱氧胸腺嘧啶和三磷酸虫草菌素为终止物。

用途

1. 通过Okayama-Berg法给载体或cDNA加上互补同聚尾。
2. 使用dNTP、ddNTP来标记DNA的3’末端。

使用注意

1. 影响反应的因素有：添加的碱基种类 (dATP,dTTP,dCTP,dGTP)，缓冲液中的二价阳离子(Mg²⁺,Mn²⁺,Co²⁺)，DNA末端结构(3’-OH突出末端，平末端，3’-OH凹陷末端)。因此，每个反应都需要摸索最适条件。
2. 对于长度为15-40 bp的核酸链，如果是3’-OH突出末端，dNTPs与DNA的最佳摩尔比是20 : 1，如果是3’-OH凹陷末端，dNTPs与DNA的最佳摩尔比是100 : 1。