Klenow Fragment

Klenow Fragment
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	2140A	200 U	170 元
Takara	2140B (A × 5)	1,000 U	770 元
Takara	2140AK	200 U	170 元
Takara	2140BK (AK × 5)	1,000 U	770 元

制品内容

Code No.: 2140A
Klenow Fragment (5 U/μl)	200 U
10 × Klenow Fragment Buffer	1 ml

Code No.: 2140AK 

Klenow Fragment (2U/μl)                               200U

制品说明

本酶在DNA模板和引物存在的条件下，选择性地催化底物dNTP沿5’→3’方向合成与模板互补的DNA。本酶是从大肠杆菌中纯化得到，其中克隆了2/3的E.coli DNA polymerase I基因片段 (3’端计算) 。因此具有3’→5’外切酶活性但是没有5’→3’外切酶活性。2140AK/BK制品是Kilo-Sequencing Deletion Kit（Code No.: 6030）的组份之一。

保存

-20℃。

起源

Escherichia coli carrying the plasmid which encodes the gene of Klenow Fragment

活性定义

以合成的Poly d(A-T) DNA为模板/引物，在37℃、pH7.4的条件下，30分钟内使10 nmol的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

纯度

1. 10 units的本酶和1 μg的超螺旋pBR322 DNA (Form I) 在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。 2. SDS-PAGE：＞95%。

用途

1. 双脱氧法DNA序列测定 (Sanger法)。 2. 双链DNA 5’突出末端的平滑化。  3. 寡核苷酸定向诱变 (Oligonucleotide directed mutagenesis) 中双链DNA的合成。 4. 使用随机引物进行DNA标记。

使用注意

1. 本酶有高度稳定性，稀释时不失活，但剧烈搅拌会失活。 2. 由于不含有5’→3’的外切核酸酶活性，因此不表现切口平移活性。 3. 双链DNA末端以及缺口 (Gap) 的修复。 4. 与T4 DNA Polymerase相比，对模板高级结构的抵抗性能较好。 5. 由于对DNA的亲和性较强，过量使用易发生凝集作用 (Aggregation) 从而抑制反应进行。 6. 若用于5’突出末端的修饰时，补平后有时会多加一个碱基。 7. 与DNA Polymerase I相同，ddNTPs的掺入不受底物抑制。