T4 RNA Ligase

T4 RNA Ligase
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	2050A	1,000 U	520 元
Takara	2050B (A × 5)	5,000 U	2,340 元

制品内容

T4 RNA Ligase (40 U/μl)	1,000 U
10 × T4 RNA Ligase Buffer	1 ml
0.1% BSA	1 ml

制品说明

本酶能使寡核苷酸的5’-P末端和3’-OH末端结合，以ATP为辅因子。最小底物为NpNpNOH和pNp。连接效率受供体和受体各自的碱基影响。DNA与RNA之间的连接效率较RNA之间的连接效率低，DNA之间的连接效率最低，常因不能识别双链核苷酸导致连接失败。

保存

-20℃。

起源

Escherichia coli B infected T4 am N82

活性定义

以Oligo(A)n为底物，标记RNA 3’末端，在5℃、10分钟内使1 pmol [5’-³²P]pCp 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位 (unit)。

纯度

1. 100 units的本酶和1 μg的λ-Hind III片段在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。 
2. 100 units的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃下反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。
3. 20 units的本酶和6 μg的λ-Hind III片段在37℃下反应16小时，通过T4 DNA Ligase可将90%以上的DNA进行连接，同时，所连接的DNA可通过Hind III 100%地再切断。
4. SDS-PAGE: ＞90%。

用途

1. 单链RNA及单链DNA的3’-OH末端的标记。以tRNAPhe为底物，50 units的本酶于5℃反应16小时，tRNAPhe的3’-OH标记率高于80%。 
2. 单链Oligo RNA及单链Oligo DNA的合成。

使用注意

1. 连接反应的最适反应温度为5-16℃，若超过该温度活性会被抑制。
2. PEG共存的条件下能够促进反应，而反应特异性不变。 
3. 为了提高连接反应效率，建议使用酶浓度高而ATP浓度尽量低的反应条件。