Mutan™ -Super Express Km

Mutan™ -Super Express Km
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	RR022	20 次	2,000 元

制品内容 (20 次量) 

TaKaRa LA Taq ( 5 U/μl )	10 μl
10×LA PCR Buffer II ( Mg2+plus)	100 μl
dNTP Mixture (each 2.5 mM )	160 μl
Selection Primer (5 pmol/μl)	20 μl
Control Synthetic Oligonucleotide Solution (5 pmol/μl)	5 μl
Control dsDNA Solution (pKF19kM) (10 ng/μl)	5 μl
pKF18k-2 DNA (0.5 μg/μl)	10 μl
pKF19k-2 DNA (0.5 μg/μl)	10 μl
E. coli MV1184 (10% glycerol solution)	100 μl

制品说明

Mutan-Super Express Km是将ODA法 (Oligonucleotide-directed Dual Amber法) 和LA PCR (Long and Accurate PCR) 技术相结合，在一天之内即可完成突变操作的试剂盒。

保存

-20 ℃。 E.coli MV1184 于-80 ℃保存。 ODA-LA PCR法原理 原理如下图所示。制品中使用的质粒载体pKF18k-2/pKF19k-2在卡那霉素抗性基因上存在双重琥珀突变，当转化sup0株的大肠杆菌MV1184时，克隆体不能表现出卡那霉素抗性。 载体中插入目的DNA片段 (2 kb以下) 后，使用突变用寡聚核苷酸 (Mutagenic oligonucleotide) 和修复琥珀突变用Selection Primer进行PCR反应，扩增两种引物间的DNA序列，形成了Mugatenic-Selection DNA。同时以Mugatenic-Selection DNA作为PCR引物，经过聚合反应形成了含有切口 (nick) 的双链DNA。在DNA链延伸过程中，由于利用了LA PCR技术，可进行正确性高的长片段PCR反应。将扩增后的DNA片段导入大肠杆菌的MV1184株 (sup0)后，切口部位被修复，在含有卡那霉素的培养基中培养，就会获得无琥珀突变且导入了特定位点突变的转化体。使用本试剂盒仅需一日即可完成效率在80%以上的特定位点突变。