Enforcement Cloning System pKF3

Enforcement Cloning System pKF3
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	6086	10 次	1,230 元

制品内容 (10 次量) 

pKF3 DNA (0.5 μg/μl)	20 μl
E.coli TH2 Competent Cells	100 μl × 10
pBR322 DNA (0.1 ng/μl)	10 μl
SOC medium	1 ml × 10

制品说明

Enforcement Cloning System pKF3是Hashimoto-Gotoh,T.等利用Enforcement Cloning法系统化的制品，使用特殊载体与大肠杆菌宿主，使只有插入了外源性基因的克隆才能生长的非常简便的克隆系统，不需要繁琐的重组体筛选，在基因库的制作、PCR产物亚克隆等方面发挥着非常重要的作用。

保存

pKF3 DNA：-20 ℃保存。 E.coli TH2 Competent Cells：-80 ℃保存。 Enforcement Cloning System的原理 核糖体是蛋白质生物合成的场所，rpsL基因编码表达核糖体的S12蛋白质。链霉素 (Sm) 与核糖体的S12蛋白质结合，使蛋白质的生物合成不能进行，细胞停止生长。rpsL基因的变异使链霉素失去结合位点，从而使该基因的大肠杆菌 (rpsL-)宿主有了对链霉素的抗性。(A) 但是同野生型基因相比，rpsL的变异处于劣势，含有rpsL+基因的质粒载体在具有链霉素抗性 (Sm抗性) 的宿主 (rpsL-) 转化后，使正常的核糖体的S12蛋白质表达，从而产生链霉素敏感性 (Sm敏感性)。(B) 在质粒载体的rpsL基因中插入外源性基因后，转化到具有链霉素抗性宿主 (rpsL-) 中，质粒载体的rpsL基因已不能使正常表达核糖体的S12蛋白质，则重组体具有链霉素抗性。(C) Enforcement Cloning System pKF3就是利用此原理，无需进行克隆筛选的克隆系统。利用含有rpsL基因的具有氯霉素抗性 (Cm抗性) 的质粒载体pKF3，在质粒载体pKF3的rpsL基因的多克隆位点中插入外源性基因，在具有链霉素抗性的菌株E.coli TH2 Competent Cells中转化后，挑选能够在含有氯霉素和链霉素的平板培养基上生长的克隆子，这些就是插入了外源性基因的克隆子。