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Cycleave® RT-PCR HFMD Virus Detection Kit 品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 Takara RR917 60 次 3,200 元
制品内容 (25 μl×60次量，其中EV×20次量，EV71×20次量，CA16×20次量)
1. 5×PrimeScript Buffer (for Real Time)*1 120 μl 2. PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅲ*2 30 μl 3. EV Universal R Primer (10 μM) 20 μl 4. EV71 R Primer (10 μM) 20 μl 5. CA16 R Primer (10 μM) 20 μl 6. 2 × CycleavePCR Reaction Mix*3 750 μl 7. EV Universal Primer/Probe Mix (FAM，ROX)(25×)*4 20 μl 8. EV71 Primer/Probe Mix (FAM，ROX) (25×)*4 20 μl 9. CA16 Primer/Probe Mix (FAM，ROX) (25×)*4 20 μl 10. RNase Free dH2O 1 ml 11. Easy Dilution Buffer (for Real Time PCR)*5 1 ml 12. Control RNA for EV Universal (5×107 Copies/μll) 20 μl 13. Control RNA for EV71 (5×107 Copies/μl) 20 μl 14. Control RNA for CA16 (5×107 Copies/μll) 20 μl *1 内含dNTP Mixture等。
*2 内含RTase、Inhibitor。
*3 内含TaKaRa Ex Taq HS，Buffer，Tli RNase H，dNTP Mixture和Mg2+等。
*4 内含内参照用模板、引物及探针，以及检测病毒用的引物和探针，应避光保存。
*5 是制作标准曲线时梯度稀释DNA或RNA标准品的稀释液。模板DNA或模板RNA如果用水或TE稀释时， 由于受Microtube的吸附作用等原因的影响，往往不能准确地进行稀释，导致实验结果精度降低。使用本制品，即使稀释至低浓度也能够进行准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。EASY Dilution也可以单独购买 (Code No.: 9160)
制品说明
自1959年由人类肠道病毒 (enterovirus，EV) 导致手足口病 (hand, foot and mouth disease，HFMD) 报道以来，HFMD已经在全球多次爆发。HFMD常由多种EV共同引起，而肠道病毒71型 (EV71) 和肠道病毒柯萨奇A16 (Coxsackie A16，CA16) 往往是手足口病暴发流行的最主要病原。
本制品是采用Cycling Probe法快速特异性检出人类肠道病毒通用型EV、特异型EV71和特异型CA16病毒的Real Time RT-PCR试剂盒。制品中病毒检测用探针使用FAM标记，内参照探针使用ROX标记，可以进行两色荧光的双通道同步检测。对内参照反应的检测，可以用以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果的产生。
制品中的DNA聚合酶使用了Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，大大提高了PCR的检测灵敏度。使用试剂盒中的Positive Control RNA制作标准曲线，可以对病毒进行定量分析。
保存
-20℃。
注意事项
1. 人类肠道病毒具有高度传染性，样品的采集、处理、保存、运输、检测实验均应遵循国家相应的管理规定和生物安全条例。必须做好相关的保护措施，以确保实验人员安全。
2. 本试剂盒检测灵敏度高，为了防止污染，实验要分区操作。
① 第一区: 反应液配制区。
② 第二区: 样品制备区。
③ 第三区: 样品添加区及反应检测区。
三个区间必须进行物理性隔离，以避免人为因素造成污染。
3. 本试剂盒所使用的Positive Control RNA是通过人工合成DNA后，再经体外转录得到的。使用安全，无感染性。
4. 为了防止Control RNA分解，应尽量避免反复冻融，若条件允许，尽量于-70℃～-80℃保存。
5. 荧光标记探针应避光保存。
6. 当同时需要进行数次Real Time RT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
7. 使用PrimeScript RT Enzyme Mix III、2× CycleavePCR Reaction Mix时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
8. 配制PCR反应液时应避免强光照射。
9. 反应液的配制、分装请一定使用新的 (无污染的)枪头、Microtube等，尽量避免污染。
10. 本试剂在反转录时不能使用Random Primer，因为Random Primer能和Cycling探针互补，Cycling探针将被切断。
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