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Cycleave® PCR 炭疽菌Detection Kit Ver.3.0 品牌 Code No. 包装量 价格 说明书 Takara CY219 96 次 3,000 元 制品内容 (25 μl反应×96 次量；PA和CAP各48 次)
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) 25 μl（96次） Tli RNase H II*1 (200 U/μl) 50 μl（96次） 5 × Reaction Mixture*2 500 μl（96次） PA Primers (PA7, PA6) (3 μM each) 250 μl（48次） CAP Primers (MO11, MO25) (3 μM each) 250 μl（48次） PA Chimera Probe Mix (FAM标记、HEX标记) (12.5×conc.)*3 100 μl（48次） CAP Chimera Probe Mix (FAM标记、HEX标记) (12.5×conc.)*3 100 μl（48次） PA Positive Control 20 μl（20次） CAP Positive Control 20 μl（20次） dH2O 1.3 ml *1 Tli RNase H II 是来源于Thermococcus litoralis 的耐热性RNase H。
*2 含有dNTP Mixture、Internal Control DNA。
*3 荧光标记Probe应避光保存。
制品说明
炭疽菌为好氧性革兰氏阳性芽孢杆菌 (1～2 × 5～10 μm)，其病原性来源于菌体中的两种毒性质粒 (pX01，pX02)。pX01质粒上有三种毒素成分 (PA：Protective Antigen；LF：Lethal Factor；EF：Edema Factor)；pX02质粒编码了荚膜合成相关基因 (capA，capB，capC)。当菌体中同时具有这两种毒性质粒时，菌体便显示出病原性，菌体中只具有其中一种毒性质粒时，菌体不显示出病原性。
本制品是通过Real Time PCR专用装置Smart Cycler® II System*快速检测pX01质粒上PA基因和pX02质粒上capA基因的试剂盒。制品中使用了Hot Start用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效抑制低温条件下由引物错配或引物二聚体引起的非特异性扩增，大大提高PCR检出灵敏度。另外，PCR检出采用了Cycling Probe法。
Cycling Probe法 (原理见下图) 是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光，通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。
制品中炭疽菌检出用探针是FAM标记，内参探针是TET标记。本制品与Smart Cycler® II System*组合使用进行Real Time PCR，无需电泳即可快速获得反应结果 (约45分钟)。由于在反应体系中设定了内参照，可以防止假阴性结果的出现。
(本制品是在短时间内简易检出炭疽菌的试剂盒，如要进行炭疽菌的最终判定，则还需结合革兰氏染色等普通微生物学方法检测的结果进行综合判定。)
*：Smart Cycler®是 Cepheid公司的注册商标。
保存
-20℃ 。
操作注意事项
1. Smart Cycler® II System请按照仪器说明书使用。
2. 如果探针、引物因混入核酸酶而被降解，则不能进行准确检测。实验者的汗液和唾液也会带入核酸酶，操作时应注意。
3. 判断为阳性的样品，请使用微生物学方法进行再确认。
4. 建议从反应液的配制到检测的实验过程中，设定以下3个实验区域，并进行物理性隔离。 在各区域要避免开闭含有扩增产物的反应管。
区域1：反应液的配制及分装。
区域2：检测样品的制备。
区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。
由于本制品是使用Real Time PCR的方法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物不需要再进行电泳。为了避免污染，严禁从反应管中取出扩增产物。
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