Cycleave® RT-PCR Giardia (18S rRNA) Detection Kit

Cycleave® RT-PCR Giardia (18S rRNA) Detection Kit
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	CY231	50 次	2,000 元

制品内容 (25 μl反应×50次量)

1. 5×PrimeScript RT Master Mix (5×conc. )	100 μl
2. 2×Cycleave Reaction Mixture (2×conc. )	625 μl
3. Giardia Primer/Probe Mix (FAM、ROX) (5×conc.)*1	250 μl
4. RNase Free dH2O	1 ml
5. Lysis Buffer	625 μl × 4支
6. Proteinase K (20mg/ml)	50 μl
7. dH2O (for Dilution)	150 μl
8. Giardia Positive Control*2 (1×105 Copies/μl)	50 μl
9. EASY Dilution (for Real Time PCR)	1ml × 2支
*1 荧光标记探针应避光保存。 *2 如果PCR组份（1-4）中混入Giardia Positive Control ，则不能进行准确的检测。 开封后，将组份（1-4）移至附带的盒中分开保存。

制品说明

贾第虫病是由贾第鞭毛虫 (Giardia lamblia又称G.intestinalis或G.duodenalis) 感染引起的一种下痢性疾病。贾第鞭毛虫是一种属于鞭毛纲的原虫，主要寄生在人和动物 (猫、狗、牛、鹿、海狸等) 的肠道内，产生具有感染性的包囊随粪便排出体外。被包囊污染的食品、饮用水经口摄入后感染给人 (或直接经粪便进入口腔)。贾第鞭毛虫产生的包囊感染性很强，据报道在水中存活数月后，其感染性也不会变弱。贾第鞭毛虫形态微小，在水净化过程中很难将其完全除去，并对氯消毒具有抵抗性。
[感染症新法]中共记载了五种贾第鞭毛虫感染症。其检测方法是以荧光抗体染色、碘-碘化钾染色后并通过显微镜镜检来确认原虫。
本制品以贾第鞭毛虫18S rRNA为目的基因，能检测基因组DNA及由RNA反转录获得的cDNA的试剂盒。由于RNA的拷贝数高于基因组DNA，使用Real Time PCR法对RNA进行检测，可检测出微量的贾第鞭毛虫。Real Time PCR法简单快速，灵敏度高，特异性好，近年来在环境卫生管理领域被广泛应用。也希望在控制贾第鞭毛虫感染方面起到一定作用。
本制品采用Cycling Probe法进行检测，Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光。通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。
试剂盒中包含了核酸抽提试剂和反转录反应试剂。DNA聚合酶使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效地抑制在配制反应液时发生的引物错配及引物二聚体引起的非特异性PCR扩增，大大提高PCR的检测灵敏度。
制品中检测贾第鞭毛虫18S rRNA基因的探针荧光物质使用了FAM标记，内参照 (Internal Control) 检测用探针的荧光物质使用了ROX标记。在同一反应管内可以对18S rRNA基因及内参照同时进行扩增，通过两种不同荧光标记的探针可以对18S rRNA基因及内参照同时检出。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高，特异性好。
本制品可以检测出Giardia Assemblage A-E，利用Giardia Positive Control可制作标准曲线，并根据标准曲线可对检测样品中的贾第鞭毛虫进行定量。

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