Cycleave® RT-PCR Cryptosporidium (18S rRNA) Detection Kit

Cycleave® RT-PCR Cryptosporidium (18S rRNA) Detection Kit
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	CY230	50 次	2,000 元

制品内容 (25 μl反应×50次量) 

1. 5×PrimeScript RT Master Mix (5×conc.)	100 μl
2. 2×Cycleave Reaction Mixture (2×conc.)	625 μl
3. Crypto. Primer/Probe Mix (FAM、ROX) (5×conc.)*1	250 μl
4. RNase Free dH2O	1 ml
5. Lysis Buffer	625 μl × 4支
6. Proteinase K (20mg/ml)	50 μl
7. dH2O (for Dilution)	150 μl
8. Crypto. Positive Control*2 (1×105 Copies/μl)	50 μl
9. EASY Dilution (for Real Time PCR)	1ml × 2支
*1 荧光标记探针应避光保存。 *2 如果PCR组份（1～4）中混入Crypto. Positive Control，则不能进行准确的PCR检测。开封后，将组份（1～4）移至附带的盒子中分开保存。

制品说明

本制品是以隐孢子虫属的18S rRNA为目的基因，能检测基因组DNA及经过RNA反转录获得的cDNA的试剂盒。由于RNA的拷贝数高于基因组DNA，使用Real Time PCR法对RNA进行检测，可检测出微量的隐孢子虫。Real Time PCR法简单快速，灵敏度高，特异性好，近年来在环境卫生管理领域被广泛应用，也有望在隐孢子虫感染的控制方面起到一定作用。
本制品采用Cycling Probe法进行检测，Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。
本制品中附带了核酸提取试剂和反转录反应试剂，并使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效地抑制在配制反应液时发生的引物错配及引物二聚体引起的非特异性PCR扩增，大大提高PCR的检测灵敏度。
制品中检测隐孢子虫18S rRNA基因的探针荧光物质使用了FAM标记，内参照（Internal Control）检测用探针的荧光物质使用了ROX标记。在同一反应管内可以对隐孢子虫18S rRNA基因及内参照同时进行扩增，通过两种不同荧光标记的探针可以对隐孢子虫18S rRNA基因及内参照同时检出。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高，特异性好。
同时，利用Crypto. Positive Control制作标准曲线，并根据标准曲线可对检测样品中的隐孢子虫进行定量。

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