Cycleave® PCR Legionella (5S rRNA) Detection Kit Ver.2.0

Cycleave® PCR Legionella (5S rRNA) Detection Kit Ver.2.0
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	CY210	50 次	2,000 元

制品内容 (25 μl反应×50 次量)

1. 2×Cycleave Reaction Mixture (2×conc.)	625 μl
2. 5S Primer/Probe Mix (FAM、ROX) (5×conc.)*1	250 μl
3. dH2O	1 ml
4. 5S Positive Control*2 (1.0×104 copies/μl)	100 μl
5. EASY Dilution (for Real Time PCR)*2	1 ml×2
*1 荧光标记探针要注意避光保存。 *2 为了避免模板污染其它Real Time PCR组分(1-3)而影响检出结果，试剂盒开封后该组分请与其它组分分开保存。

制品说明

以Legionella pneumophila为代表的军团菌属细菌是好氧型革兰氏阴性杆菌。广泛分布于土壤和淡水中，冷却水塔、循环式水浴槽、温泉等环境水。通过空气传播，经呼吸道吸入人体引起军团菌症。目前，被发现的军团菌有70种以上，这些种类军团菌都有可能引起军团菌症。但从军团菌症患者和环境水中检出的结果看，Lagionella pneumophila检出率最高。传统的军团菌检出主要手段是通过培养方法来判断，此方法费时，操作麻烦。 
本制品是使用Real Time PCR法迅速检出军团菌属菌共有的5S rRNA基因Kit。制品中DNA聚合酶使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，大大提高PCR的检测灵敏度。该检测使用了Cycling Probe法。Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光，通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。
CycleavePCR Legionella (5S rRNA) Detection Kit Ver.2.0含有5S阳性对照，可以通过制作标准曲线进行定量分析。
制品中5S基因用FAM标记，内参照用ROX标记，在同一反应管内对5S rRNA及内参照 (Internal Control) 同时进行扩增，通过两种不同荧光标记的探针可以对5S rRNA基因及内参照同时检出，实现双通道同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。

保存

-20℃ (运输及保存温度)。

操作注意事项

1. Real Time PCR仪的使用请参照仪器说明书进行。
2. 如果杂合探针、引物因混入核酸酶而被降解，则不能准确进行检测。实验者的汗液和唾液也会带入核酸酶，操作时应注意。 
3. 本Kit是对基因进行检测的试剂盒，因此死菌也能被检测出来，当判断样品为阳性时，要用微生物学方法进行再确认。
4. PCR反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染，建议从反应液的配制到检测的实验过程中，设定以下3个实验区域，并进行物理性隔离。 
    任何区域都不要开闭装有扩增产物的Tube管。 
    区域1：反应液的配制及分装。
    区域2：检测样品的制备。
    区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。 
    由于本制品是使用Real Time PCR的方法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物不需要再进行电泳。为了避免污染，严禁从Tube管中取出扩增产物。
5. 本制品是使用Real Time PCR扩增仪对结果进行分析、判定。当Real Time PCR扩增仪的Auto功能不适合时，将会导致结果判定错误。此时可参照Real Time PCR扩增仪说明书进行手动设定。