Cycleave® PCR Listeria monocytogenes (inlA gene) Detection Kit

Cycleave® PCR Listeria monocytogenes (inlA gene) Detection Kit
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	CY223	50 次	2,000 元

制品内容 (25 μl反应×50 次量)

2×Cycleave Reaction Mixture (2×conc.)	625 μl
INL A Primer / Probe Mix (FAM、ROX) (5×conc.)*	250 μl
dH2O	1 ml
INL A Positive Control	150 μl
* 含有荧光标记探针，要避光保存。

制品说明

李斯特菌是革兰氏阳性菌、有鞭毛、无芽孢的短杆菌 (0.4-0.5×0.5-2.0 μM)。在分类学上属于李斯特菌属，这个菌属共有8种菌。其中只有Listeria monocytogenes菌是引起人李斯特菌症的病原菌。引起发热、头痛的同时会引发髓膜炎、败血症、心内膜炎、肺炎等的多发性病症。1980年以来作为集体食物中毒的病原菌 (即食物中毒病原菌) 引起人们注意。
本Kit是以Listeria monocytogenes的细胞侵入关连基因Internalin A (inlA) 的编码序列作为目的基因，使用Real Time PCR方法进行扩增检测的试剂盒。
制品中使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可防止在循环反应前因引物错配、引物二聚体所产生的非特异性扩增。
该检测使用了Cycling Probe法。Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光，通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。
制品中检测inlA基因的探针用FAM标记，内参照 (Internal Control) 检测用探针用ROX标记，在同一反应管内对inlA基因及内参照同时进行扩增，通过两种不同荧光标记探针可以对inlA基因和内参基因同时检出，实现双通道同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高，特异性强。
注: 本试剂盒的研究成功需要特别感谢东京海洋大学的木村凡和高桥肇先生的协助和技术支持。

保存

-20℃ (运输及保存温度)。

注意事项

1. Real Time PCR仪的使用请按照说明书进行。
2. 如果杂合探针、引物因混入核酸酶而被降解，则不能准确进行检测。实验者的汗液和唾液也会带入核酸酶，操作时应注意。
3. 判断为阳性的样品，要用微生物学方法进行再确认。 
4. PCR反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染，建议从反应液的配制到检测的实验过程中，设定以下3个实验区域，并进行物理性隔离。 任何区域避免开闭装有扩增产物的Tube管。

     区域1：反应液的配制及分装。
    区域2：检测样品的制备。 
    区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。 
    由于本制品使用Real Time PCR法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物不需要再进行电泳。为了避免污染，严禁从Tube管中取出扩增产物。 
5. 本制品是使用Real Time PCR扩增仪对结果进行分析、判定。 当Real Time PCR扩增仪的Auto功能不适合时，将会导致结果判定错误。此时可参照Real Time PCR 扩增仪说明书进行手动设定。