Cycleave® PCR Bacteria Screening Kit

Cycleave® PCR Bacteria Screening Kit
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	CY208	50 次	2,500 元

制品内容 (ENT, BS各25μl反应×25 次量)

TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl)	12.5 μl (50次)
Tli RNase H II*1 (200 U/μl)	25 μl (50次)
2×Reaction Mixture*2（2× conc.）	625 μl (50次)
ENT Primer Mixture (5μM each)	37.5 μl (25次)
BS Primer Mixture (5μM each)	37.5 μl (25次)
ENT Probe*3 (25×conc.)	25 μl (25次)
BS Probe*3 (25×conc.)	25 μl (25次)
ENT Positive Control (1×104 copies/μl)	10 μl (10次)
BS Positive Control (1×104 copies/μl)	10 μl (10次)
dH2O	1 ml
10% Chelex Solution (10%)	12 ml
*1 Tli RNase H II是来源于Thermococcus litoralis 的耐热性RNase H酶。 *2 含有dNTP Mixture。 *3 荧光标记探针应遮光保存。

制品说明

为了保证食品安全，食品供应的每一个环节要确保食品的质量，而PCR则是公认的食品质量控制的有效方法之一。本制品使用SmartCycler System或SmartCycler II System (Cepheid) 进行Real Time PCR检测细菌中16S rRNA基因，使用ENT Primer^* 和ENT Probe (FAM标记) 检出含大肠杆菌和沙门氏菌的肠内细菌科的菌群，使用BS Primer^* 和BS Probe (ROX标记) 检出杆菌属的蜡质芽孢杆菌和葡萄菌属的金黄色葡萄球菌。本试剂盒与细菌培养相结合，可以在短时间对极微量的菌体样品进行检测。
制品中使用了Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效地抑制低温条件下由引物错配及引物二聚体引起的非特异性PCR扩增，大大提高了PCR的检测灵敏度。
本制品采用Cycling Probe法进行检测，是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光。通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。扩增产物无需电泳，约40分钟即可获得PCR反应结果。
* 试剂盒中使用的Primer与Bacteria Screening PCR Kit (Code No.: RR114A) 中使用的ENT Primer和BS Primer相同，PCR扩增时同时使用了对PCR扩增产物内部序列进行检测的Cycling Probe，与Bacteria Screening PCR Kit具有同样的反应特异性。

保存

10% Chelex Solution：室温运输、4℃保存 
其它组分: -20℃运输及保存

探针标记

操作注意事项

1. 请按照Real Time PCR扩增仪的使用说明书进行操作。
2. 如果杂合探针、引物因混入核酸酶而被降解，则不能准确进行检测。实验者的汗液和唾液含有核酸酶， 操作时应注意。
3. 判断为阳性的样品，要用微生物学方法进行再确认。
4. PCR反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染，建议从反应液的配制到检测的实验过程中，设定以下 3个实验区域，并进行物理性隔离。
    区域1：反应液的配制及分装。
    区域2：检测样品的制备。
    区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。 
由于本制品使用Real Time PCR法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物不需要再进行电泳。为了避免污染，严禁从Tube管中取出扩增产物。