Cycleave® PCR Vibrio (tdh gene) Detection Kit

Cycleave® PCR Vibrio (tdh gene) Detection Kit
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	CY220	50 次	2,000 元

制品内容 (25 μl反应×50 次量)

2×Cycleave Reaction Mixture (2×conc.)	625 μl
TDH Primer / Probe Mix (FAM、ROX) (5×conc.)*	250 μl
dH2O	1 ml
TDH Positive Control	150 μl (30 次量)
* Primer由岛津制作所制造，含有荧光标记探针要注意避光存放。

制品说明

副溶血性弧菌 (Vibrio parahaemolyticus) 是一种嗜盐性细菌，该菌主要存在于近海岸的海水、海底沉积物及鱼贝类等海产品中，是日本、美国及东南亚国家食物中毒和急性腹泻病的重要病原菌。该病原菌产生的耐热溶血性毒素(TDH)是食物中毒病原体之一。 
本制品以耐热溶血性毒素基因 (tdh基因) 为目的基因，使用Real Time PCR方法进行检测的试剂盒。采用Cycling Probe法对检测tdh基因的探针用FAM标记，内参照检测探针用ROX标记，在同一反应管内对tdh基因及内参照 (Internal Control) 同时进行扩增，通过两种不同荧光标记探针可以对tdh基因和内参照基因同时检出，实现双通道同步检测。其中使用了改良后的Hot Start法用 DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可有效防止在循环反应前因引物错配、引物二聚体所产生的非特异性扩增，可进行高灵敏度的检测。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高、特异性强。
Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光，通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。
本试剂盒是与静冈环境和卫生研究所的Dr. Kenji Sugiyama共同开发制造的。

保存

-20℃。

操作注意事项

1. 请按照Real Time PCR仪的使用说明书进行操作。 
2. 如果探针、引物因混入核酸酶而被降解，则不能准确检测。实验者的汗液和唾液也可能会带入核酸酶，操作中应注意。
3. 判定为阳性的样品，请使用微生物学方法再次确认。
4. 为防止污染，建议从反应液的配制到检测，设定以下3个区域，进行物理隔离。
    区域1：反应液的配制及分装。
    区域2：检测样品的制备。
    区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。 
    由于本Kit使用Real Time PCR法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物无需进行电泳。另外，为了避免污染，严禁从Tube中取出扩增产物。
5. 本Kit是使用Real Time PCR扩增仪对结果进行分析、判定。当Real Time PCR扩增仪的Auto功能不适合时，将会导致结果判定错误。如有需要，可参照Real Time PCR扩增仪说明书进行Manual设定。