Cycleave® PCR Campylobacter (jejuni/coli) Typing Kit

Cycleave® PCR Campylobacter (jejuni/coli) Typing Kit
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	CY225	50 次	2,000 元

制品内容 (25 μl反应×50次量；C.jejuni和C.coli各25次量)

2×Cycleave Reaction Mixture (2×conc.)	625 μl
C.jejuni Primer/Probe Mix (FAM、ROX)*1 (5×conc.)	125 μl
C.coli Primer/Probe Mix (FAM、ROX)*1 (5×conc.)	125 μl
dH2O	1 ml
C.jejuni Positive Control*2	50 μl（10次反应）
C.coli Positive Control*2	50 μl（10次反应）
*1 含荧光标记探针，应避光保存。 *2 应与其他试剂分开于-20℃保存，避免污染其他试剂。

制品说明

弯曲菌 (Campylobacter) 作为食物中毒的主要病菌而备受关注。弯曲菌是在氧气含量3～10%的微好氧条件下生长的螺旋状革兰氏阴性菌。弯曲菌引起的主要炎症是肠炎，其致病菌的90%是Campylobacter jejuni (以下简称C.jejuni)，只有少数是Campylobacter coli (以下简称C.coli)。不同的菌种引起的症状也各异，所以在检菌的同时，菌种鉴定也非常重要。目前弯曲菌的检测、鉴定是通过细菌培养法进行的，但由于细菌生长缓慢，前培养至少需要2天，再加上需要几天的菌种鉴定培养实验，弯曲菌菌种鉴定需要1周时间，因此希望利用PCR法等基因检测技术进行快速检测、鉴定。
本制品可以检测弯曲菌的Cytolethal distending toxin (cdtC gene) 的C亚基基因，使用荧光定量PCR法检测和判断C.jejuni和C.coli。制品中使用了Hot Start法的DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可有效抑制因错配或引物二聚体引起的非特异性扩增，大大提高了PCR的检测灵敏度。
本制品采用Cycling Probe法进行检测，Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光。通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。
试剂盒中包含了核酸抽提试剂和反转录反应试剂。DNA聚合酶使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效地抑制在配制反应液时发生的引物错配及引物二聚体引起的非特异性PCR扩增，大大提高PCR的检测灵敏度。
制品中检测C.jejuni和C.coli的cdtC基因的探针用FAM标记，内参照 (Internal Control) 检测探针用ROX标记。在同一反应管内可以对cdtC基因及内参照 (Internal Control) 同时检出，实现双通道同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高，特异性好。
本制品用于分别检测C.jejuni和C.coli的cdtC基因 (注意：不可将C. jejuni Primer/Probe Mix和C. coli Primer/Probe Mix混合在一起做多重PCR反应)。

保存

-20℃。