Cycleave® PCR O-157 (VT1/VT2) Typing Kit

Cycleave® PCR O-157 (VT1/VT2) Typing Kit
品牌	Code No.	包装量	价格	说明书
Takara	CY222	50 次	2,000 元

制品内容 (25 μl反应 VT1, VT2各25次量)

1. 2×Cycleave Reaction Mixture (2×conc.)	625 μl
2A. VT1 Primer / Probe Mix (FAM、ROX) (5×conc.)*	125 μl
2B. VT2 Primer / Probe Mix (FAM、ROX) (5×conc.)*	125 μl
3. dH2O	1 ml
4. NaOH Solution (50 mM)	1.5 ml×4
5. Tris-HCl Buffer pH7.0 (1 M)	500 μl×2
6. dH2O (for Dilution)	1 ml
7. VT1 Positive Control	100 μl (20 次)
8. VT2 Positive Control	100 μl (20 次)
*Primer由岛津制作所制造，含有荧光标记探针，要注意避光。 本Primer分别对Vero毒素1型 (VT1) 及2型 (VT2、VT2vha、VT2vhb、VT2vpl) 基因进行检测，目的片段大小为171 bp。 制品组分1, 2A, 2B, 3使用制品附带的盒子保存，与4～8分开存放。

制品说明

肠出血性大肠埃希氏菌 (EHEC) 是革兰氏阴性菌，属于肠杆菌科埃希氏菌。主要包括O-157：H7和O-157：H-两个血清型，O-157：H7的一个显著特点是能产生大量的志贺样毒素，此毒素能使Vero细胞变性，溶解和死亡，又被称为Vero毒素 (Verotoxin)。
本制品是通过Cycling Probe法对肠出血性大肠杆菌O157：H7 (Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC) 引起食物中毒的Vero毒素基因VT1型，VT2型进行检测的试剂盒。制品中VT1，VT2基因用FAM标记，内参照用ROX标记，在同一反应管内可以对Vero毒素VT1基因或者VT2基因与内参照 (Internal Control) 同时进行扩增，通过两种不同荧光标记的探针可以在同一个反应管内对VT1基因和内参照或者VT2基因和内参照同时检出。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果。制品中DNA聚合酶使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，大大提高PCR的检测灵敏度。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度及特异性高。另外，本Kit是对VT1基因和VT2基因分型试剂盒，对于一个样品进行分型时，需要在两个反应管内对VT1基因和VT2基因分别进行反应，VT1基因和VT2基因检出用Primer/Probe Mix不能混合使用。如果不想进行分型，可以选择CycleavePCR O-157 (VT gene) Screening Kit Ver.2.0(Code No. CY217)试剂。
Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光，通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。

保存

-20℃ (运输及保存温度)
开封后制品组分1～3和4～8使用制品附带的盒子分开存放，于-20℃保存。

操作注意事项

1. 请按照Real Time PCR仪的使用说明书进行操作。 
2. 如果杂合探针、引物因混入核酸酶而被降解，则不能准确检测。实验者的汗液和唾液也可能会带入核酸酶，操作中应注意。
3. 判定为阳性的样品，需要再进行微生物学方法检测做综合判断。
4. PCR反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染，建议从反应液的配制到检测，设定以下3个区域，进行物理隔离。
    区域1：反应液的配制及分装。不要开闭装有扩增产物或检测样品的Tube。
    区域2：检测样品的制备。不要开闭装有扩增产物或检测样品的Tube。
    区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。
    由于本Kit使用Real Time PCR法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物不需要再进行电泳。另外，为了避免污染，严禁从Tube中取出扩增产物。
5. 本Kit是使用Real Time PCR扩增仪对结果进行分析和判定。当Real Time PCR扩增仪的Auto功能不适合时，将会导致结果判定错误。如有需要，可参照Real Time PCR扩增仪说明书进行Manual设定。